● RevIT™ AAV Enhancer：可1.2-4.9X提升AAV病毒基因組滴度

平行對(duì)比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增強(qiáng)子(VirusGen + Enh 1.0)以及新版本RevIT™ AAV Enhancer (VirusGen + RevIT)，針對(duì)不同血清型 AAV2、AAV8、AAV9，AAV基因組滴度分別有著1.6、4.9以及1.2倍提升。除此之外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在測(cè)試的所有血清型中，使用RevIT™ AAV Enhancer也在不同程度上得到更高比例的實(shí)心率 (圖1)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，可顯著提高病毒基因組滴度(GC/mL)及實(shí)心率(%Full Capsids)。

?圖1. 在加入RevIT™ AAV Enhancer后，相比Mirus老版本增強(qiáng)子，可1.2-4.9X提升AAV基因組拷貝數(shù)，改善AAV病毒實(shí)心率。

● RevIT™ AAV Enhancer：具有廣泛適配性，可搭配其他品牌轉(zhuǎn)染試劑（PEI），AAV病毒基因組滴度有著顯著提升

平行測(cè)試兩個(gè)品牌轉(zhuǎn)染試劑：Polyplus FectoVIR® 病毒轉(zhuǎn)染試劑(“Polymer F")以及Polyplus PEIpro®病毒轉(zhuǎn)染試劑(“Polymer P")，在加入Mirus RevIT™ AAV Enhancer，針對(duì)不同血清型AAV2、AAV8、AAV9，AAV基因組滴度分別有著1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(圖2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在搭配其他品牌病毒轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，Mirus RevIT™ AAV Enhancer可顯著提高AAV病毒基因組滴度(GC/mL)。

?圖2. “Polymer F"以及“Polymer P"病毒轉(zhuǎn)染試劑，在搭配Mirus RevIT™ AAV Enhancer，針對(duì)不同血清型，其AAV病毒基因組滴度都有著顯著提升。

● RevIT™ AAV Enhancer：具有廣泛的適配性，可適用于不同培養(yǎng)基體系

TransIT-VirusGEN®轉(zhuǎn)染試劑搭配RevIT™ AAV Enhancer，在不同類型病毒生產(chǎn)培養(yǎng)基中，具有很好的兼容性。測(cè)試使用293-VP 2.0細(xì)胞，搭配培養(yǎng)基類型包括VPM (Thermo Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，針對(duì)不同血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9，RevIT™ AAV Enhancer在不同培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)條件下，AAV病毒基因組滴度提升方面并無顯著差異。

?圖3. 更換不同品牌病毒生產(chǎn)培養(yǎng)基，AAV病毒基因組滴度的增加無顯著差異。

● RevIT™ AAV Enhancer：實(shí)驗(yàn)流程靈活性，不同加入時(shí)間窗口有著近似表現(xiàn)

為了進(jìn)一步確定加入RevIT™ AAV Enhancer可有效提高AAV病毒基因組載量，是否需要嚴(yán)格把控加入時(shí)間窗口。平行測(cè)試不同加入時(shí)間點(diǎn)，包括轉(zhuǎn)染前30或60分鐘、轉(zhuǎn)染時(shí)及轉(zhuǎn)染后。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相對(duì)于對(duì)照，在加入RevIT™ AAV Enhancer不同測(cè)試時(shí)間點(diǎn)， AAV8病毒基因組滴度都有穩(wěn)步的提升(2倍)，并且病毒實(shí)心率穩(wěn)定保持在相同水平。該組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，RevIT™ AAV Enhancer加入時(shí)間點(diǎn)的靈活性，一定程度上簡化了生產(chǎn)工作流。

?圖4.  RevIT™ AAV Enhancer加入時(shí)間點(diǎn)的靈活性

● 實(shí)驗(yàn)tips：如何進(jìn)行病毒轉(zhuǎn)染試劑評(píng)估？什么是病毒載量？如何檢測(cè)？

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