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MirusBio全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

更新時間:2024-01-02   點擊次數:622次

基于需要遞轉不同種類核酸/蛋白類型研究,在細胞轉染環節,研究者們常碰到如下三類問題:

1、細胞對化學試劑較為敏感,轉染后,細胞活率下降或死亡;

2、研究常用細胞類型較多,不同類型細胞,轉染效率差異較大,導致單個轉染試劑或者實驗流程,無法滿足實驗需求;

3、遞轉多種類型核酸或蛋白,需要挑選對應的轉染試劑,并且需要大量實驗優化,才可以得到較高的轉染效率。

 

有沒有一款化學轉染試劑,可以同時應對常規到難轉染的細胞類型,有著較低的細胞毒性,并且適用于多種核酸/蛋白類型遞轉呢?兼具多重功能、高性能的TransIT-X2®轉染試劑,可同時應對常見細胞及難轉染細胞類型,避免條件摸索、大量的重復性實驗,輕松地得到您理想的實驗結果。

● 已驗證在大多數細胞類型中(如貼壁/懸浮細胞、原代細胞、神經細胞等),都有著優異的轉染效率、低毒性(特別相對于形成脂質體復合物的Lipofectamine®系列試劑)、高性能的表現;

● 適用于多種研究領域,包括不限于干細胞研究、基因編輯CRISPR研究、RNAi基因干擾/沉默、穩轉細胞株構建、低毒性的轉染實驗、共轉染實驗等;

● 允許高效且穩定的同時遞轉多種核酸/蛋白類型,包括不限于質粒 DNAsiRNA/miRNA 和 CRISPR/Cas9 組分。

 

1Mirus產品年鑒

Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

為什么 Mirus TransIT-X2® Dynamic Delivery System 有著如此高性能及廣泛適應性呢?這歸因于Mirus強大且高效的專-利遞轉平臺設計,可進行多重、多功能組合的轉染試劑組分篩選并優化。成立于1995年的Mirus,專注及深耕核酸遞轉領域多年,從最早具有低毒性的TransIT ® -LT1GMP級別、可用于AAVLV生產的TransIT-VirusGEN®,都是基于該遞轉平臺進行設計及開發。直至文稿發布時,使用Mirus產品發表文章已超過1萬篇,并且發表文章及Mirus數據庫涵蓋了超過12百種細胞類型,更多文章及數據查詢,請見訪問鏈接:因平臺限制,請聯系欣博盛生物獲取

 

2Mirus轉染試劑原理示意圖

Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

不同于傳統基于單組分的轉染試劑(如陽離子聚合物或陽離子脂質體),為了進一步提高轉染效率,以應對不同細胞類型或特定的應用。Mirus將專-利的多聚物(Polymer)及脂質(Lipids)技術進行多重組合,在不形成脂質體復合物(liposome,通常具有細胞毒性)前提條件下,得到多種類、高性能的轉染方案,克服細胞遞轉過程中的多重阻礙,以實現更高效轉染和更低的細胞毒性(2)

 

3Mirus獨-有智能迭代設計,轉染試劑優化流程示意圖

Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

基于上述Mirus強大、高效的專-利遞轉平臺設計,在進行多重、多組合篩選、優化及后續驗證。獨-有的智能迭代設計流程,優化轉染技術中的每個組分。Mirus推出一系列經典轉染試劑,以應對多種需求:

1、廣譜、高性能、低毒性的轉染試劑家族: TransIT-X2®TransIT®-LT1TransIT®-2020

2、針對特定細胞類型的轉染試劑家族:TransIT®-293TransIT®-BrCaTransIT®-CHOTransIT-HeLaMONSTER®TransIT®-InsectTransIT®-JurkatTransIT®-Keratinocyte

3、針對特定應用的轉染試劑家族:

★.病毒生產:VirusGEN® 轉染試劑及配套試劑盒、TransIT®-Lenti

★.蛋白/抗體生產:TransIT-PRO®CHOgro® Expression SystemCHOgro® High Yield Expression System

4、寡核苷酸遞轉的轉染家族:TransIT®-OligoTransIT-siQUEST®TransIT-TKO®

5mRNA及長鏈RNA遞轉:TransIT®-mRNA

 

  Mirus TransIT-X2® 轉染試劑性能數據 展示圖  

4TransIT-X2®Dynamic Delivery System在包括原代細胞多種細胞類型中,具有較高轉染效率。

Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

Mirus TransIT-X2®Dynamic Delivery System遞轉表達EGFP質粒DNA分別至A549CHO-K1Hep G2MDCKLNCaPPC-12、原代人乳腺上皮細胞(HMEC)和正常人真皮成纖維細胞(NHDF)細胞中。實驗使用96孔板, TransIT-X2®試劑加入量為0.2-0.4µlDNA加入量為0.1µg(使用試劑:DNA=2:13:14:1)。轉染后48小時,使用Guava® easyCyte™ 5HT流式細胞儀重復檢測三次,評估轉染效率。

 

5、相較于使用單一組分且形成陽離子脂質體復合物(liposome)Lipofectamine®系列轉染試劑,TransIT-X2®有著更高的轉染效率及更低細胞毒性

Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

使用TransIT-X2®(Mirus Bio)Lipofectamine®2000 (Thermo Fisher Scientific)Lipofectamine®3000 (Thermo Fisher Scientific)轉染熒光素酶編碼質粒DNAA549 (A)MDCK (B)細胞中,轉染24小時,通過熒光素酶活性評估轉染效率,定量受損細胞中釋放的LDH評估細胞毒性。與Lipofectamine®2000Lipofectamine®3000的細胞相比,在最佳試劑:DNA比例下,Trans - x2®有著更高的熒光強度及更低的細胞毒性。


實驗Tips: 針對更多特定細胞類型,試劑使用建議,詳細請見:因平臺限制,請咨詢欣博盛生物獲取


  Mirus TransIT-X2® RNAi干擾實驗中性能數據展示  

6、不同RNAi干擾途徑示意圖

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基因沉默相關功能研究在分子和細胞生物學中發揮著重要作用,化學轉染也在該研究領域扮演者重要角色。常見參與RNAi干擾途徑的天然RNA分子包括:

★.小干擾 RNA (Small interfering RNAs, siRNA) 由雙鏈 RNA(dsRNA)斷裂所產生的短雙鏈 RNA(20-25bp)

★.微小 RNA(MicroRNAs, miRNAs) 非編碼 RNA 處理后所產生的一類短的、單鏈 RNA(20-22nt)

利用 RNAi 抑制基因表達的另一種方法為短發夾 RNA(short hairpin RNA , shRNA),這些短 RNA 序列可通過病毒或非病毒載體方式進行表達,更多詳細信息可查閱Mirus Applications | RNAi Gene Silencing

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7、基于siRNA核酸遞轉類型的基因沉默研究,相比Lipofectamine® 2000TransIT-X2®有著更高的基因沉默效率

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TransIT-X2®Dynamic Delivery SystemLipofectamine®2000轉染試劑用于轉染siRNA(靶點為內源性蛋白質- GAPDHAHA1),對照使用正常人類真皮成纖維細胞(NHDF)遞轉非靶向siRNATrans IT-X2®加入量為4µl Lipofectamine®2000加入量為6µlsiRNA加入量都為25 nM。使用qRT-PCR相對于18s rRNA水平測量GAPDHAHA1 mRNA進行檢測,轉染后48小時均一化至非靶向對照組的mRNA水平,誤差則為三次復孔實驗的標準差。

 

8、基于miRNA (miRNA PrecursormiRNA mimic)基因沉默研究,相比Lipofectamine® 2000TransIT-X2®有著更高的基因沉默效率

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TransIT-X2®Dynamic Delivery SystemLipofectamine®2000轉染試劑用于轉染Pre-miR™ hsa-miR-1 miRNA Precursor 或者mirVana™ miRNA mimic, miR-1 (兩者都已驗證,可降低PTK9 mRNA表達水平)Pre-miR™陰性質控用于評估mRNA表達水平基線值。Trans IT-X2®Lipofectamine®2000試劑加入量都為3µl 加入50 nM miRNA。使用qRT-PCR相對于18s rRNA水平,經過陰性質控的均一化,得到PTK9 mRNA表達水平值。


  Mirus TransIT-X2® CRISPR基因編輯實驗中性能數據展示  

經過改造及優化的細菌 CRISPR/Cas9 系統,已被廣泛應用到哺乳細胞的基因編輯中。基于CRISPR基因編輯實驗常見兩組分:Cas9蛋白及引導RNA(gRNA)。當Cas9蛋白切割了靶向基因組DNA,會觸發兩種內源性修復機制,即非同源末端連接(NHEJ)和同源定向修復(HDR),以應對細胞中產生的DNA斷裂。基于NHEJ細胞修復通路,為非精準、且容易出錯細胞修復通路,可引入導致基因功能缺失的Indel。基于HDR的細胞修復通路,則需要額外的同源 DNA 作為修復模板,從而實現精準"修復,在目的基因插入特定的基因或長片段序列。

Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型


【 根據研究者們不同的實驗需求 】 

CRISPR基因編輯可以有多種類型實驗設置,這意味需要面對不同核酸類型的轉染甚至共轉染,舉例如下:

 

1、質粒pDNA轉染

作為CRIPSR實驗關鍵兩組分:Cas9蛋白及gRNA,可以設計單個質粒DNA,共同表達兩組分(A);或者使用兩質粒系統,其中一個質粒表達Cas9蛋白,另外一個質粒表達gRNA(B);當使用Cas9切口酶(Nickase),則需要兩條gRNA,這時可能需要三質粒系統的遞轉實驗。


Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

 

2、質粒DNARNA寡核苷酸共轉染

此時,與上述實驗設計不同的是,gRNA以寡核苷酸形式進行遞轉,這就意味著遞轉實驗需要同時轉染質粒DNA以及RNA寡核苷酸(AB)

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3mRNARNA寡核苷酸共轉染

為了避免由于質粒DNA基因組整合而導致的脫靶效應,可以共轉染編碼Cas9蛋白的mRNAgRNA (RNA寡核苷酸)

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4Cas9/gRNA RNP復合物遞轉

隨著Cas9蛋白及gRNA商品化趨于成熟,越來越多的研究者們選擇直接從第三方購買高保真Cas9蛋白,以及有著額外化學修飾且在細胞內更穩定的gRNA寡核苷酸。除了極大的縮短和簡化CRISPR實驗流程外,相對于質粒或者mRNA方式合成,直接遞轉RNP復合物的方式有著更高的特異性及編輯效率。

Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型


實驗Tips: 針對上述不同CRISPR實驗設計及遞轉情形,TransIT-X2® Dynamic Delivery System經優化的具體實驗說明

下載鏈接如下:

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9、質粒DNAgRNA寡核苷酸共轉染:TransIT-X2®分別在293T/17U2OSNHDF細胞中共轉Cas9質粒DNAgRNA(RNA寡核苷酸),都有著較高的基因編輯效率(18-48%)

Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

使用TransIT-X2® Dynamic Delivery System  (2 µl/孔,24孔板, Mirus Bio)共轉染0.5 µg質粒DNA(表達Cas9蛋白)50nM 2-part gRNA (PPIB基因)HEK293T/17, U2OS NHDF細胞中,轉染后48小時,T7E1驗證切割效率。

 

10Cas9/gRNA RNP復合體遞轉:相較于Lipofectamine®系列轉染試劑,TransIT-X2®有著更高的切割效率

Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

2-part gRNA (PPIB基因,IDT) Cas9 蛋白(PNA Bio)形成RNP復合體,分別使用TransIT-X2® Dynamic Delivery System(1 µl/孔, Mirus Bio)Lipofectamine® CRISPRMAX™ (1.5 µl/孔, ThermoFisher) Lipofectamine® RNAiMAX (1.5 µl/, ThermoFisher) Lipofectamine® 3000 (1.5 µl/ThermoFisher) 遞轉至293T/17U2OS細胞中。測試gRNA兩種使用量(6 nM12 nM),相同Cas9 蛋白加入量(6 nM),轉染后48小時,T7E1驗證切割效率。


  Mirus TransIT-X2® 產品優勢  

?、新型基于多組分開發的廣譜型轉染試劑(適用于多種細胞,包括難轉細胞)

?、可同時轉染核酸及蛋白,包括不限于DNAsiRNA/miRNACRISPR/Cas9復合物;

?、不形成脂質體復合物,降低細胞毒性;

?、滿足多種應用:基因過表達、基因沉默、基因編輯、干細胞研究、穩轉細胞株構建等。

 

  相關產品信息  

產品名稱

規格

貨號

TransIT-X2®  Dynamic 

Delivery System

1×0.3ml

MIR6003

1×0.75ml

MIR6004

1×1.5ml

MIR6000

5×1.5ml

MIR6005

10×1.5ml

MIR6006

 

 


Mirus全能型轉染試劑:TransIT-X2®應對多種核酸/蛋白及細胞類型

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