免疫組化試劑盒檢測的原理是采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗。計算方法是以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
免疫組化試劑盒在沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
1.樣品稀釋：酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應，如果血清不稀釋，不可避免會產生很強的非特異性反應，出現假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規定將血清稀釋至適當的倍數，以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴格按使用說明書操作，如產品應取10u1樣品進行稀釋，個別用戶取5u1甚至1u1樣品進行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數不準確，檢測結果出現問題。
2.試劑盒平衡：試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20~30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒打開盒蓋置37℃溫箱20分鐘。稀釋前、后的樣品需要充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。
3.加樣：盡量操作規范，將液體垂直懸空快速加入到微孔板中，避免加到孔避上。加完試劑后用手適當振蕩或在桌面適當作圓周運動，使孔內試劑充分混勻，蓋好蓋板膜。
4.洗板：洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置10-15s，甩去板孔中洗液后，一定要用力拍干；及時更換吸水紙，尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗結果。
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